蜀科低速冷凍離心機(ji)在實驗(yan)室(shi)樣品前處理中有重要(yao)的作(zuo)用。今天我們來(lai)了(le)解(jie)一下前處理的過程。
一、勻漿介質的制備
一般采用pH7.4,0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊(0.1g~0.2g)少可到2~5mg在冰冷的生理(li)鹽水中(zhong)(zhong)漂洗,除去血液(ye),濾紙拭(shi)干(gan),準確稱重,放入5ml的勻(yun)漿管中(zhong)(zhong)。
2、按重量(g):體(ti)積(ji)(ml)=1:9的(de)比例加入9倍(bei)體(ti)積(ji)的(de)勻(yun)(yun)漿介(jie)質(zhi)(pH7.4,0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖,0.8%的(de)氯化鈉(na)溶液)或者0.86%的(de)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)于勻(yun)(yun)漿管中,冰水(shui)浴條(tiao)件(jian)下,用眼科小(xiao)剪(jian)盡快剪(jian)碎組織(zhi)塊(kuai)。
3、勻漿(jiang)的方式有多種:手工勻漿(jiang),機器勻漿(jiang),超聲粉碎(sui)。
①手工勻(yun)漿:左(zuo)手持(chi)勻(yun)漿管將下端插(cha)入盛有(you)冰水(shui)混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插(cha)入套管中,上下轉(zhuan)動研(yan)磨數十次(6~8分(fen)鐘),充分(fen)研(yan)碎,制成10%的勻(yun)漿液(ye)。
②機(ji)(ji)器勻漿(jiang):用組(zu)織(zhi)(zhi)搗碎機(ji)(ji)10000~15000轉(zhuan)/分上(shang)下研磨(mo)制成(cheng)10%組(zu)織(zhi)(zhi)勻漿(jiang),也(ye)可用內切式組(zu)織(zhi)(zhi)勻漿(jiang)機(ji)(ji)制備(bei)(勻漿(jiang)時間10秒(miao)/次,間隙(xi)30秒(miao),連續3~5次,在冰水(shui)中進行),皮膚、肌肉組(zu)織(zhi)(zhi)等可延長勻漿(jiang)時間。
③超聲(sheng)(sheng)粉(fen)碎:用超聲(sheng)(sheng)粉(fen)碎機進行粉(fen)碎,可用Soniprep150型(xing)超聲(sheng)(sheng)波(bo)發(fa)生(sheng)器以振幅14微米超聲(sheng)(sheng)處理30秒(miao)使細胞破碎,也可用國產超聲(sheng)(sheng)波(bo)發(fa)生(sheng)儀(yi),用400安培,5秒(miao)/次(ci),間(jian)隙10秒(miao)反復3~5次(ci)。
鏡檢觀察:取少量組織(zhi)勻漿(jiang)作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)是否破碎,若(ruo)沒有則(ze)可延長勻漿(jiang)時間。
4、將制備好的10%勻漿(jiang)液(ye)用蜀科低速冷凍離(li)心機2500轉/分左右,離(li)心10~15分鐘,取上清(qing)液進(jin)行(xing)測定.
三、樣本保存
動物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,好當天進(jin)行測(ce)定(ding),如(ru)放置時間(jian)過(guo)長相關(guan)酶活會有(you)所下降,部分(fen)指(zhi)標4℃可存放3~5天(如(ru)SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測(ce)定(ding)可存5~7天等)。
在實驗室樣品前處理中,蜀科低(di)速冷凍離心機(ji)發揮了重要(yao)作(zuo)用(yong)。蜀科(ke)低速(su)冷(leng)凍離心機(ji)加熱(re)制冷(leng)速(su)度快,精(jing)度高,操作(zuo)簡單,性能穩定(ding)、安全可靠(kao),是(shi)各實驗(yan)室選購(gou)的明智選擇!
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