今天我們講實驗室離心機的另一種離心方法:差速離心法。差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用于混合樣品中各沉降系數差別較大組分的分離。
1.工(gong)作原理
通(tong)常(chang)兩(liang)個組分(fen)(fen)的(de)(de)沉(chen)降(jiang)系數差(cha)在(zai)10倍以上時可(ke)以用此法分(fen)(fen)離(li)(li)(li)。例如(ru)某樣(yang)品中有大、中、小三個組分(fen)(fen),用差(cha)速離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)法分(fen)(fen)離(li)(li)(li)時,把(ba)樣(yang)品放在(zai)離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)管內(nei),先(xian)按大組分(fen)(fen)的(de)(de)沉(chen)降(jiang)系數選擇離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)轉速和離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)時間,當離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)結束時正好使大組分(fen)(fen)全部(bu)(bu)沉(chen)降(jiang)到(dao)離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)管底(di)部(bu)(bu),這時中小組分(fen)(fen)中的(de)(de)一(yi)(yi)(yi)部(bu)(bu)分(fen)(fen)也(ye)會(hui)沉(chen)降(jiang)到(dao)底(di)部(bu)(bu)。若原始樣(yang)品液(ye)中三個組分(fen)(fen)的(de)(de)含量(liang)相等,則在(zai)原始樣(yang)品液(ye)中大組分(fen)(fen)占總組分(fen)(fen)量(liang)的(de)(de)三分(fen)(fen)之一(yi)(yi)(yi)。通(tong)過一(yi)(yi)(yi)次(ci)離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)后(hou)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)出的(de)(de)大組分(fen)(fen)沉(chen)淀(dian)占總組分(fen)(fen)量(liang)約90%。如(ru)要進一(yi)(yi)(yi)步(bu)提(ti)純可(ke)以把(ba)此沉(chen)淀(dian)物再(zai)溶解,再(zai)按大組分(fen)(fen)的(de)(de)沉(chen)降(jiang)條件離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin),得(de)到(dao)大組分(fen)(fen)的(de)(de)第(di)二(er)次(ci)離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)沉(chen)淀(dian)。通(tong)過多次(ci)對沉(chen)淀(dian)和上清液(ye)差(cha)速離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin),可(ke)以把(ba)三個沉(chen)降(jiang)系數有差(cha)別的(de)(de)組份分(fen)(fen)離(li)(li)(li)提(ti)純,所以這個方法又稱為分(fen)(fen)步(bu)離(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)(xin)法。
2.差速離心(xin)法的優缺(que)點(dian)
差速離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)法(fa)的(de)(de)優點是(shi)樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)處理量(liang)較大(da),可用(yong)于(yu)大(da)量(liang)樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)初分(fen)離(li)(li)(li)(li)。其(qi)缺點是(shi)分(fen)離(li)(li)(li)(li)復雜樣(yang)(yang)品(pin)和要求分(fen)離(li)(li)(li)(li)純(chun)度較高時(shi),離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)次數多,操作繁雜。由于(yu)沉(chen)(chen)(chen)淀的(de)(de)多次清洗、溶(rong)解、再沉(chen)(chen)(chen)淀,容(rong)易引(yin)起中間損失,所以(yi)離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)分(fen)辨力差。實際分(fen)離(li)(li)(li)(li)時(shi)由于(yu)離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)時(shi)的(de)(de)對流、擴散(san)和收(shou)取沉(chen)(chen)(chen)淀時(shi)的(de)(de)污染,對于(yu)一些(xie)沉(chen)(chen)(chen)降系(xi)數相(xiang)差不大(da)的(de)(de)組分(fen)無法(fa)進(jin)行*的(de)(de)分(fen)離(li)(li)(li)(li)提純(chun)。產品(pin)的(de)(de)純(chun)度和回收(shou)率都達不到上述(shu)理論(lun)值。因(yin)此(ci)差速離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)(xin)法(fa)主(zhu)要用(yong)于(yu)大(da)量(liang)樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)初步分(fen)離(li)(li)(li)(li)提純(chun)。
使(shi)用(yong)離心(xin)機進(jin)行(xing)密度梯度離心(xin)和(he)差速離心(xin)的(de)差別主要有三點:
1.差速離心(xin)(xin)法(fa)是用不同(tong)強度(du)(du)的離心(xin)(xin)力使具(ju)有不同(tong)質(zhi)量的物質(zhi)分級分離,密度(du)(du)梯(ti)(ti)度(du)(du)離心(xin)(xin)中單一(yi)樣品組份的分離是借助(zhu)于混合樣品穿過密度(du)(du)梯(ti)(ti)度(du)(du)層(ceng)的沉降或(huo)上浮來(lai)達到的。
2.差速離(li)心(xin)(xin)用兩個甚更多的轉(zhuan)速,而密度(du)梯度(du)離(li)心(xin)(xin)只(zhi)用一個離(li)心(xin)(xin)轉(zhuan)速。
3.差(cha)速離心是(shi)適(shi)用于混合樣品中各沉降系(xi)數(shu)差(cha)別較大組(zu)分,而密度梯度離心的物質是(shi)密度有(you)一定差(cha)異的。
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