實驗室離心機分(fen)離(li)(li)(li)(li)方法(fa)不(bu)一,適(shi)用場合也不(bu)盡相同。目(mu)前主流的(de)離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)分(fen)離(li)(li)(li)(li)方法(fa)主要是差速(su)離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)法(fa)和(he)區帶離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)法(fa),其實在實驗(yan)室離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)技術制備超離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)法(fa)一文中(zhong)有提及兩(liang)種離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)方法(fa),今天(tian)筆者對這兩(liang)種方法(fa)的(de)原理及應(ying)用介紹進(jin)行補充(chong)和(he)完善(shan)。
1. 差速(su)離(li)(li)(li)心法(fa):許(xu)多具有生物活性的(de)(de)(de)生物大(da)(da)(da)分(fen)子和亞細胞器是不(bu)(bu)(bu)穩定的(de)(de)(de),需要低溫高速(su)離(li)(li)(li)心,常用(yong)的(de)(de)(de)是差速(su)離(li)(li)(li)心法(fa)。通過離(li)(li)(li)心后倒出(chu)(chu)上清(qing)液和沉(chen)淀(dian)分(fen)開(kai),把分(fen)離(li)(li)(li)出(chu)(chu)來(lai)的(de)(de)(de)上清(qing)液再增(zeng)大(da)(da)(da)轉(zhuan)速(su)離(li)(li)(li)心,分(fen)離(li)(li)(li)出(chu)(chu)第二部(bu)分(fen)沉(chen)淀(dian),這樣不(bu)(bu)(bu)斷增(zeng)大(da)(da)(da)轉(zhuan)速(su),逐級分(fen)離(li)(li)(li)出(chu)(chu)所需要的(de)(de)(de)物質。利(li)用(yong)這種(zhong)方法(fa)可以有效(xiao)地分(fen)離(li)(li)(li)大(da)(da)(da)小上差別較大(da)(da)(da)的(de)(de)(de)顆粒,但不(bu)(bu)(bu)能分(fen)離(li)(li)(li)大(da)(da)(da)小相似的(de)(de)(de)顆粒,而且所分(fen)離(li)(li)(li)出(chu)(chu)來(lai)的(de)(de)(de)組分(fen)往(wang)往(wang)是不(bu)(bu)(bu)均一的(de)(de)(de),雜有其他種(zhong)類(lei)的(de)(de)(de)顆粒。
2.區帶離心法:其中又可以分為兩種:速率區帶離心和等密度速率區帶離心。
1) 速率區帶離心法:這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上,用此梯度液來穩定顆粒的沉降。由于離心,顆粒離開起始區帶而移動,移動的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受實驗室離心機的(de)離(li)心(xin)(xin)力(li)來決定的(de)。離(li)心(xin)(xin)一(yi)段時間歷,各(ge)種穎粒(li)將按照它們的(de)相對速度(du)(du)移動而各(ge)個分開,成為一(yi)系(xi)列(lie)區帶。用這(zhe)種方法我們可以將沉降速度(du)(du)差為20%或者(zhe)更大(da)的(de)顆粒(li)。
2)等密度(du)區帶離(li)(li)心法:這(zhe)是(shi)將要(yao)分(fen)離(li)(li)的(de)(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)懸液(ye)放密度(du)梯(ti)(ti)度(du)液(ye)上,或(huo)者(zhe)(zhe)實(shi)際上將顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)溶(rong)于(yu)(yu)制(zhi)作梯(ti)(ti)度(du)的(de)(de)(de)(de)溶(rong)液(ye)中(zhong)。通過離(li)(li)心,顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)或(huo)者(zhe)(zhe)上浮(fu)或(huo)者(zhe)(zhe)下沉,達到(dao)與(yu)它(ta)們自己密度(du)相(xiang)同的(de)(de)(de)(de)液(ye)體(ti)處(chu)在(zai)這(zhe)里它(ta)們沒有重(zhong)量,不管離(li)(li)心多長(chang)時間,它(ta)們再也不移動了。這(zhe)些(xie)顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)可成為一(yi)(yi)系列區帶,每(mei)種(zhong)顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)在(zai)它(ta)自己的(de)(de)(de)(de)密度(du)區。所(suo)以,這(zhe)是(shi)一(yi)(yi)種(zhong)利用顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)浮(fu)密度(du)的(de)(de)(de)(de)大小分(fen)離(li)(li)顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)大小的(de)(de)(de)(de)方法。使用的(de)(de)(de)(de)介質通常是(shi)氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4)。前者(zhe)(zhe)適(shi)(shi)合(he)于(yu)(yu)DNA分(fen)離(li)(li),后者(zhe)(zhe)適(shi)(shi)合(he)于(yu)(yu)RNA分(fen)離(li)(li)。這(zhe)種(zhong)方法與(yu)速率(lv)區帶離(li)(li)心法相(xiang)比,它(ta)有一(yi)(yi)個主要(yao)的(de)(de)(de)(de)缺點是(shi)在(zai)離(li)(li)心期(qi)間,顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)不可避免地暴露在(zai)高濃度(du)的(de)(de)(de)(de)梯(ti)(ti)度(du)溶(rong)液(ye)中(zhong),會引起(qi)顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)部分(fen)損傷,并可能出(chu)現(xian)相(xiang)當于(yu)(yu)損傷顆(ke)(ke)粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)些(xie)額外的(de)(de)(de)(de)區帶。
聯系我們
四川蜀科儀器有限公司 公司地(di)址:四川省(sheng)成都市溫江區(qu)海(hai)旺路(lu)99號5號樓 技(ji)術(shu)支持:掃一掃 更多精彩
微信二維碼