乙(yi)(yi)醇被*為是一種可以(yi)替代汽油的液體燃(ran)料(liao)，也(ye)是很好的燃(ran)油品(pin)質改善劑，甘(gan)蔗可以(yi)生成乙(yi)(yi)醇燃(ran)料(liao)。為提高(gao)甘(gan)蔗發酵效率，可提取釀酒酵母(mu)a288c基因組，克隆INO1基因，在工業釀酒酵母(mu)中過表(biao)達，提高(gao)菌種耐乙(yi)(yi)醇能力，提高(gao)細胞活力。下(xia)(xia)面簡單介紹下(xia)(xia)提取和擴增過程。

釀酒酵母基因組提取

  原始釀酒酵母菌株s288c活化后，使用YPD固體培養基進行平皿劃線分離得到釀酒酵母菌株s288c單菌落，牙簽挑取單菌落接50ml YPD液體培養基進行30 ℃搖瓶培養24-30 h，用蜀科高速冷凍離心機去上清（采用高速冷凍離心機保護樣本生物活性）；按照釀酒酵母基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。

INO1基因序列擴增

  以釀酒酵母S288C基因組DNA為(wei)模(mo)板進行PCR擴增。反(fan)應條件如下：預變性94℃ 5 min，變性94℃30s，退火54℃ 30s,延(yan)伸72℃ 97s，30個(ge)循環，延(yan)長72℃。10min保存4℃。反(fan)應結束后取(qu)2 uL PCR擴增產物于1％瓊脂糖凝膠電泳(yong)進行檢測。采用(yong)膠回收試劑盒進行膠回收。

  回收后的PC產物進行(xing)連接(jie)、轉化和菌液PCR檢(jian)測，后進行(xing)質粒提取和測序。

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